Caracterización y desarrollo de Virus Like Particles (VLPs) del bacteriófago MS2 con capacidad de carga proteica.

Abstract

El cáncer de pulmón es responsable de 1,8 millones de muertes por año en el mundo, y los tratamientos existentes no son suficientes para contrarrestar esta enfermedad. El desarrollo de una plataforma versátil que permita transferir drogas quimioterapéuticas o proteínas recombinantes de manera específica a células tumorales y que, a su vez disminuya los efectos secundarios, podría mejorar la calidad de vida de muchas personas. Las Virus Like Particles (VLPs) son cápsides virales carentes de material genético viral que se autoensamblan a partir de una o varias proteínas estructurales. En particular, las VLPs derivadas del bacteriófago MS2 (VLPs-MS2) tienen un gran potencial terapéutico. El proyecto en el cual se encuadra esta tesis de licenciatura involucra el desarrollo de una plataforma basada en este virus de estructura simple. Las VLPs-MS2 pueden ser utilizadas como nanotransportadores para encapsular diferentes cargos terapéuticos en su interior y, mediante modificación externa de las cápsides, ser dirigidas hacia tejidos tumorales, disminuyendo los efectos colaterales. En este trabajo, se optimizó la producción heteróloga en bacterias de las VLPs-MS2 mediante la puesta a punto de las condiciones de cultivo e inducción y mediante modificaciones en el vector de expresión. Estas últimas incluyen ediciones en la secuencia codificante, en el promotor T7 y en la Región de Inicio de la Traducción (TIR) para aumentar los niveles de expresión de proteína recombinante. También, se pusieron a punto 2 procesos de purificación de las VLPs-MS2, uno mediante Cromatografía de Exclusión Molecular y otro mediante Filtración de Flujo Tangencial y posterior columna de intercambio catiónica. Finalmente, como prueba de concepto de que estas VLPs-MS2 pueden transportar cargos, se diseñaron Quantum Dots para ser encapsulados por las VLPs-MS2. La producción a escala de este vector permitirá continuar con los ensayos necesarios para validar el uso de estas VLPs en el tratamiento del cáncer de pulmón.